ОпубликовалаБоровикова Ольга - гинеколог, генетикбыло Обновлено: 2019-07-31

Проработка исследований о связи эндометриоза и полиморфизма гена KRAS

Эндометриоз характеризуется наличием эндометриальных тканей вне полости матки. Данная патология затрагивает 6-10% женщин фертильного возраста и проявляется выраженными болями, дисменореей, аномальными маточными кровотечениями, а также бесплодием.


У 50% женщин бесплодие сопровождается эндометриозом. Проявления заболевания могут отличаться или полностью отсутствовать. В этом случае диагноз выставляется при рутинном обследовании, когда проводится диагностика иной гинекологической патологии. В некоторых случаях постановка правильного диагноза может откладываться на долгие годы.

Несмотря на то, что для лечения заболевания используется ряд лекарственных препаратов, в том числе оральные контрацептивы, прогестины, агонисты гонадотропин-рилизинг гормона. Медикаментозная терапия часто не дает положительного эффекта. В 36% случаев после проведения хирургического лечения, требуется повторная операция.

погрешность

Обследовано 2077 человек

Такая неоднородность клинической картины и расхождений в результатах терапии, может быть связана с различными фенотипическими вариантами заболевания. Изучение всех этих вариантов необходимо для индивидуализации лечения и достижения оптимальных результатов.

Хотя генетическая предрасположенность к эндометриозу несомненно имеет место, только предстоит определить гены, ответственные за данное заболевание. Проведенное в естественных условиях исследование модели спонтанного мышечного эндометриоза показало, что активация онкогенного гена KRAS в поверхностном эпителии яичников мыши привело к образованию новых очагов эндометриоза. В результате этого было предложено, что активация данного пути может играть роль в формировании данной патологии у людей. Однако, данная теория пока еще не была подтверждена у женщин методом мутационного анализа.

МикроРНК — небольшие молекулы РНК, которые отвечают за посттранскрипционную экспрессию генов. Они связываются с UTR на целевом мессенджере РНК и приводят к снижению трансляции белков. Let-7 семейство микроРНК подавляет трансляцию KRAS. Специфический однонуклеотидный полиморфизм, в котором происходит нуклеотидная замена аллелей, является фактором риска для немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака груди. Предполагалось, что данное изменение ухудшает прогноз течения заболевания, усиливая риск метастазирования. Однако, эта теория не подтвердилась.

Основываясь на имеющихся данных о влиянии KRAS, мы выдвинули гипотезу о том, что он может влиять на развитие эндометриоза. В нашем исследовании было обнаружено, что 31% (41 из 132) проанализированных пациентов с гистологически доказанным эндометриозом имеет дефект в гене KRAS, что значительно превышает среднее значение в здоровой популяции. Кроме того, эндометриоз, ассоциированный с дефектом данного гена характеризовался более высокой скоростью распространения очагов. Однако, в других исследовательских группах не удалось выявить такой закономерности. Подобные исследования проводились в 2010 году в Японии и в 2011 году в Европе.

Ввиду противоречивых результатов было решено произвести оценку частоты встречаемости дефекта в гене KRAS у пациентов с эндометриозом. Исследование проводилось по методике случай-контроля. Определялся фактор является ли дефект данного гена одной из причин формирования эндометриоза или он маркер заболевания, которое устойчиво к медикаментозной терапии.

Материалы и методы

Был проведен сбор данных у 2077 женщин, которые прошли лапароскопию по поводу бесплодия и отсутствия болевого синдрома с января 1993 года по февраль 2010 года. Все пациенты перенесли оперативное лечение и дали письменное согласие на проведение вмешательства.

Были собраны образцы крови и проведена биопсия. В исследовании изучались женщины с эндометриозом всех степеней тяжести, выставленных согласно американской классификации. В тех случаях, когда был выявлен эндометриоз, проводилась хирургическая абляция или резекция. Данное исследование было одобрено комитетом по этике больницы Лювена, а также Каролинского института.

Экстракция ДНК

Как говорилось ранее, для проведения рутинного обследования, проводился сбор ДНК из ЭДТА-стабилизированной крови. Исследование проводилось на базе университетских клиник, Лёвена, Бельгия. Использовались следующие методы: Chemagic DNA, Auto Pure LS, Purgene. Выбор метода экстракции основывался на количестве собранной крови, а также метода ее забора.

ДНК, полученная при биопсии, изучалась с использованием QIAGEN QIAmp DNA, согласно протоколу. Концентрация ДНК измерялась при помощи NanoDrop 1000. Также, в некоторых случаях использовалась очистка фенолом.

Генетическое тестирование

Для высокопроизводительного генотипирования, выделенные образцы ДНК амплифицировались с использованием анализа полимеразной цепной реакции TaqMan, разработанной специально для аллеля Т или G гена KRAS. Работа была выполнена в MiraDx, в одобренной CLIA лаборатории, использующей KRAS-вариантный аллель.

Статистический анализ

Анализ данных выполнялся с использованием IBM SPSS. Тест хи-квадрат использовался для анализа данных аллелей. Для сравнения интервальных данных применялся тест ANOVA и Т-тест. Статистическая значимость — p < 0.05.

Результаты

Характеристики группы


обследование
В общей сложности было обследовано 2077 субъектов, которые перенесли лапароскопическое вмешательство по поводу бесплодия. Около 90% обследуемых являлись европейскими кавказцами. Для большинства операция была первичной. Всего 1140 женщинам было проведено гистологическое обследование, в то время как у 937 оно отсутствовало. Диагноз бесплодия был зарегистрирован в 1071 медицинской записи.


соотношение
Овуляция, имплантация, трубные и генетические проблемы были выявлены в 9,5%, 1,4%, 5,6% и 0,3% случаев соответственно в группе с подтвержденным эндометриозом и 20,2%, 3,5%, 24,9% и 1% в группе без лапароскопического подтверждения диагноза. В 83% случаев с эндометриозом, бесплодие было классифицировано, как беспричинное.


выявлено
По стадиям эндометриоза, процентное соотношение было следующим: 1 стадия — 34,4%, 2 стадия — 21,3%, 3 стадия — 16,5%, 4 стадия — 26,5%. Около 1,1% не имели выставленной стадии заболевания. Средний AFS балл для всех пациентов с эндометриозом составил 29±33,6. Бесплодие чаще диагностировалось у курящих субъектов, чем у некурящих.

Частота G и Т аллелей в LCS6 на 3’UTR в гене KRAS

Во всей проанализированной популяции, ген Т типа был обнаружен у 1756 человек (84,5%), смешанный вариант (TG ген), встречался у 308 пациентов (14,8%), чистый G вариант в 8,04% случаев.

В итоге, для получения достоверной разницы между контрольными группами, нами было проанализировано всего 316 аллелей. Всего же в исследовании, анализу подверглось 4154 аллели.

Сравнение пациентов с эндометриозом и без него, несущего оба варианта аллеля в гене KRAS

Частота первичного и вторичного бесплодия у пациентов с диагностированным эндометриозом или без него, не отличались, независимо от наличия аллелей G и Т типа. В тех случаях, когда была известна причина бесплодия, вариант аллеля не был связан с индивидуальной этиологией.

Все четыре группы, обследуемых имели одинаковый ИМТ, и приблизительно одинаковый возраст во время проведения оперативного вмешательства. В итоге, варианты аллелей не имели никакой связи ни с ИМТ, ни с возрастом.

Обсуждение

В предыдущем исследовании было обнаружено, что 31% пациентов с умеренным и тяжелым эндометриозом подвергаются хирургическому лечению для снятия болевого синдрома после отсутствия эффекта от медикаментозной терапии. Нами было предположено, что полиморфизм генов может быть связан со степенью тяжести заболевания и играет роль в его формировании.

Однако, дальнейшие проведенные исследования по этому вопросу, не подтвердили повышенную частоту вариантных аллелей при эндометриозе. В данном исследовании был включен в список большее количество больных для проведения статистического анализа. В итоге определено, что частота данного аллеля составляет приблизительно 8%, что подтверждает проведенные ранее исследования.

В итоге не выявили повышенную частоту вариантных аллелей с эндометриозом. К сожалению, в данном исследовании не смогли проверить связь гена KRAS с другими проявлениями эндометриоза, такими как боль или кровотечения, поскольку проводилась выборка исключительно по пациентам с бесплодием, а остальные проявления заболевания не были задокументированы в большинстве случаев.

В итоге, в нашей статье мы пытались найти полиморфизм связанный именно с бесплодием, а не с хронической болью и нарушениями месячного цикла. В обоих исследования использовался один и тот же метод определения полиморфизма, поэтому вероятность ошибки сведена к минимуму.

В большинстве случаев, которые мы исследовали, до операции не проводилась медикаментозная терапия, поэтому сложно оценивать ее эффективность. Мы предполагаем, что наличие специфический аллелей в гене KRAS не является признаком предрасположенности к заболевания, а скорее маркером устойчивости его к медицинскому лечению.

Наше исследование показывает, что KRAS вариант нельзя считать маркером предрасположенности к эндометриозу в европейской популяции. В итоге, в патогенезе KRAS-ассоциированного варианта эндометриоза остается много вопросов. В нашем исследовании мы показали, что у пациентов с эндометриозом, уровень экспрессия мРНК гена KRAS, значительно усиливалась в сравнении со здоровой популяцией.

Учитывая появление новых данных, можно с уверенностью говорить, что KRAS ген играет большую роль при эндометриозе, однако это требует дальнейших клинических исследований.

Список литературы:

1. Giudice LC. Clinical practice. Endometriosis. N Engl J Med. 2010 Jun; 362(25): 2389–98.
2. Giudice LC, Kao LC. Endometriosis. Lancet. 2004 Nov; 364(9447): 1789–99.
3. Eskenazi B, Warner ML. Epidemiology of endometriosis. Obstet Gynecol Clin North Am. 1997 Jun; 24(2): 235–58.
4. ПабМед: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31185482
5. Macer ML, Taylor HS. Endometriosis and infertility: a review of the pathogenesis and treatment of endometriosis-associated infertility. Obstet Gynecol Clin North Am. 2012 Dec; 39(4): 535–49.
6. Hudelist G, Fritzer N, Thomas A, Niehues C, Oppelt P, Haas D, et al. Diagnostic delay for endometriosis in Austria and Germany: causes and possible consequences. Hum Reprod. 2012 Dec; 27(12): 3412–6.
7. Brosens I, Gordts S, Benagiano G. Endometriosis in adolescents is a hidden, progressive and severe disease that deserves attention, not just compassion. Hum Reprod. 2013 Aug; 28(8): 2026–31.
8. Abbott JA, Hawe J, Clayton RD, Garry R. The effects and effectiveness of laparoscopic excision of endometriosis: a prospective study with 2-5 year follow-up. Hum Reprod. 2003
Sep; 18(9): 1922–7.
9.Guo SW. Recurrence of endometriosis and its control. Hum Reprod Update. 2009 Jul-Aug; 15(4): 441–61.
9. Dunselman GA, Vermeulen N, Becker C, Calhaz-Jorge C, D’Hooghe T, De Bie B, et al.; European Society of Human Reproduction and Embryology. ESHRE guideline: management of women with endometriosis. Hum Reprod. 2014 Mar; 29(3): 400–12.
10. Taylor HS, Giudice LC, Lessey BA, Abrao MS, Kotarski J, Archer DF, et al. Treatment of Endometriosis-Associated Pain with Elagolix, an Oral GnRH Antagonist. N Engl J Med. 2017 Jul; 377(1): 28–40.
11. Moen MH, Magnus P. The familial risk of endometriosis. Acta Obstet Gynecol Scand. 1993 Oct; 72(7): 560–4.
12. Dinulescu DM, Ince TA, Quade BJ, Shafer SA, Crowley D, Jacks T. Role of K-ras and Pten in the development of mouse models of endometriosis and endometrioid ovarian cancer. Nat Med. 2005 Jan; 11(1): 63–70.
13. Zhao ZZ, Nyholt DR, Le L, Martin NG, James MR, Treloar SA, et al. KRAS variation and risk of endometriosis. Mol Hum Reprod. 2006 Nov; 12(11): 671–6.

Вы готовы участвовать в исследованиях?
ДаНет

Ольга Боровикова

Об авторе: Боровикова Ольга

гинеколог, врач УЗИ, генетик

Окончила Кубанский государственный медицинский университет по специальности "лечебный".

здание Кубанского государственного медицинского университета

Окончила School of Medicine Wright State University по специальности "ультразвуковая диагностика".

Место работы: Клиника "Космет"

Автор в социальных сетях:

вконтакте инстаграмм
Счастливая беременность

Вам будут интересны эти статьи:

  • Анализ современных методов лечения рака молочной железы при беременностиАнализ современных методов лечения рака молочной железы при беременности
  • Лечение первичного гиперпаратиреоза при беременности: описание серии случаевЛечение первичного гиперпаратиреоза при беременности: описание серии случаев
  • Аллергически-подобные реакции на метиленовый синий после проведения лапароскопической хромпертубацииАллергически-подобные реакции на метиленовый синий после проведения лапароскопической хромпертубации
  • Важность соблюдения интервала между родами после проведенного кесарева сеченияВажность соблюдения интервала между родами после проведенного кесарева сечения
  • Кинурениновый путь: новая цель для лечения проявлений преэклампсииКинурениновый путь: новая цель для лечения проявлений преэклампсии
  • Взаимосвязь объема плаценты с гипертоническими нарушениямиВзаимосвязь объема плаценты с гипертоническими нарушениями

Внимание!

Информация, опубликованная на сайте Sberemennost.ru только для чтения и предназначена лишь для ознакомления. Посетители сайта не должны использовать их в качестве медицинских рекомендаций!

Поделитесь своим мнением :)

info-widget__image
Ольга Боровикова
Эксперт и консультант сайта
×